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生化儀的工作原理是通過不同成分對(duì)光的吸收程度不同進(jìn)行檢測(cè)的,在吸光度檢測(cè)中,有采用單波長(zhǎng)方式,也有采用雙波長(zhǎng)方式,該如何選擇呢?其實(shí)這不是人為選擇的,而是根據(jù)其檢測(cè)成分來確定的。
山東國康全自動(dòng)生化儀的參數(shù)中關(guān)于測(cè)量波長(zhǎng)是這樣描述的:300-800nm(單/雙波長(zhǎng)),什么是單波長(zhǎng)與雙波長(zhǎng)呢?它的檢測(cè)原理及作用是什么。
一、單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)的概念
采用一個(gè)波長(zhǎng)檢測(cè)物質(zhì)的光吸收強(qiáng)度的方式成為單波長(zhǎng)方式。當(dāng)反應(yīng)液中含有一組分,或在混合反應(yīng)液中待測(cè)組分的吸峰與其他共存物質(zhì)的吸波長(zhǎng)無重疊時(shí),可以選用。使用一個(gè)主波長(zhǎng)和一個(gè)次波長(zhǎng)的城雙波長(zhǎng)方式。當(dāng)反應(yīng)液中存在干擾物的較大吸收、從而影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性時(shí),采用雙波長(zhǎng)方式更好。
二、雙波長(zhǎng)的作用:
1、消除噪音干擾。
2、減少雜散光影響。
3、減少樣品本身光吸收的干擾:當(dāng)樣品中存在非化學(xué)反應(yīng)的干擾物如甘油三酯、血紅蛋白、膽紅素等時(shí),會(huì)產(chǎn)生非特異性的光吸收,雙波長(zhǎng)方式可以部分消除這類光吸收干擾。
三、生化儀波長(zhǎng)的確定方式:
當(dāng)被測(cè)物的主波長(zhǎng)確定以后,根據(jù)干擾物吸收光譜特征選擇次波長(zhǎng),是干擾物在主、次波長(zhǎng)處又盡可能相同的光吸收值,而被測(cè)無在主、次波長(zhǎng)處的光吸收值應(yīng)有較大差異。一般來說,次波長(zhǎng)應(yīng)大于主波長(zhǎng)100mm。一主波長(zhǎng)與次波長(zhǎng)吸光度差來計(jì)算結(jié)果。
四、雙波長(zhǎng)的具體應(yīng)用:
生化儀對(duì)于某些反應(yīng)速度快且無法設(shè)置為兩點(diǎn)終點(diǎn)法的分析項(xiàng)目,尤其是單試劑分析中,可以利用雙波長(zhǎng)的方式來部分消除樣品本身的光吸收干擾。目前用單試劑法測(cè)定的項(xiàng)目應(yīng)用雙波長(zhǎng)的為血清總蛋白(雙縮脲法)主波長(zhǎng)500nm,次波長(zhǎng)576nm;血清白蛋白(溴甲酚氯法)主、次波長(zhǎng)分別為600和700nm;鈣(偶氮砷Ⅲ法)主、次波長(zhǎng)分別為660、770nm;磷(紫外比色法)主、次波長(zhǎng)為340、405nm,鎂(二甲苯胺藍(lán)法)主、次波長(zhǎng)為505和600nm。
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